Ny sivana fluorescence dia singa tena ilaina amin'ny microscope fluorescence. Ny rafitra mahazatra dia manana sivana fototra telo: sivana fientanam-po, sivana famoahana ary fitaratra dichroic. Matetika izy ireo dia fonosina ao anaty goba ka ampidirina ao anaty mikraoskaopy ilay vondrona.
Ahoana no fiasan'ny sivana fluorescence?
Sivana fientanam-po
Ny sivana fientanam-po dia mampita hazavana amin'ny halavan'ny onjam-peo manokana ary manakana ny halavan'ny onjam-peo hafa. Azo ampiasaina hamokarana loko isan-karazany izy ireo amin'ny alàlan'ny fametahana ny sivana mba hamela loko iray ihany. Ny sivana fientanam-po dia tonga amin'ny karazany roa lehibe - sivana mandalo lava sy sivana band pass. Ny exciter dia matetika sivana bandpass izay mandalo afa-tsy ny halavan'ny onjan'ny fluorophore, ka manamaivana ny fientanentanana amin'ny loharano hafa amin'ny fluorescence ary manakana ny hazavana mampientanentana ao amin'ny tarika emission fluorescence. Araka ny asehon'ny tsipika manga eo amin'ny sary, ny BP dia 460-495, izay midika fa afaka mandalo amin'ny fluorescence 460-495nm ihany izy.
Apetraka ao anatin'ny lalan'ny fahazavana amin'ny mikraoskaopy fluorescence izy io ary manivana ny halavan'ny onjam-pahazavana rehetra afa-tsy ny elanelana fientanam-po fluorophore. Ny fifindran'ny sivana kely indrindra dia mandidy ny famirapiratana sy ny famirapiratan'ny sary. Ny fifindran'ny 40% farafahakeliny ho an'ny sivana excitation rehetra dia atolotra mba hahatonga ny fifindrana ho> 85%. Ny bandwidth an'ny sivana fientanam-po dia tokony ho ao anatin'ny elanelan'ny fientanam-po fluorophore ka ny halavan'ny onjam-pandrefesana (CWL) an'ny sivana dia akaiky araka izay azo atao amin'ny halavan'ny onjam-pandrefesana ambony indrindra amin'ny fluorophore. Ny fanivanana optique density (OD) excitation dia mibaiko ny haizin'ny sary ambadika; Ny OD dia fandrefesana ny fomba hanakanan'ny sivana ny halavan'ny onjam-peo ivelan'ny elanelana fampitana na bandwidth. OD farafahakeliny 3.0 no soso-kevitra fa OD 6.0 na mihoatra no mety indrindra.
Sivana emission
Ny sivana emission dia mikendry ny hamela ny fluorescence tiana avy amin'ny santionany ho tonga any amin'ny detector. Manakana ny halavan'ny onjam-peo fohy kokoa izy ireo ary manana fifindran'ny avo kokoa ho an'ny halavan'ny onjam-peo lava kokoa. Ny karazana sivana dia mifandray amin'ny isa ihany koa, ohatra BA510IF ao amin'ny sary (sivana sakana fitsabahana), io anarana io dia manondro ny halavan'ny onjam-peo amin'ny 50% amin'ny fifindrany ambony indrindra.
Ireo tolo-kevitra mitovy amin'ny sivana fientanam-po dia marina ho an'ny sivana famoahana: fifindran'ny kely indrindra, bandwidth, OD, ary CWL. Ny sivana emission miaraka amin'ny CWL tsara indrindra, ny fifindran'ny kely indrindra, ary ny fitambaran'ny OD dia manome ny sary mamiratra indrindra, miaraka amin'ny fanakanana lalina indrindra, ary miantoka ny fahitana ireo famantarana emission malemy indrindra.
Dichroic Mirror
Ny fitaratra dichroic dia apetraka eo anelanelan'ny sivana excitation sy ny sivana emission amin'ny zoro 45 ° ary maneho ny mari-pandrefesana mankany amin'ny fluorophore rehefa mamindra ny famantarana emission mankany amin'ny detector. Ny sivana dichroic tsara indrindra sy ny fizarazarana taratra dia manana fifindrana maranitra eo anelanelan'ny fisaintsainana ambony indrindra sy ny fifindran'ny ambony indrindra, miaraka amin'ny fandinihana> 95% ho an'ny bandwidth an'ny sivana fientanam-po ary fifindran'ny> 90% ho an'ny bandwidth ny sivana emission. Safidio ny sivana miaraka amin'ny halavan'ny onjam-pandrosoana (λ) amin'ny fluorophore ao an-tsaina, mba hanamaivanana ny hazavana mania ary hanamafisana ny tahan'ny famantarana amin'ny feo.
Ny fitaratra dichroic amin'ity tarehimarika ity dia ny DM505, nomena anarana satria 505 nanometers ny halavan'ny onjam-peo amin'ny 50% amin'ny fifindrana ambony indrindra ho an'ity fitaratra ity. Ny curve fifindran'ity fitaratra ity dia mampiseho fifindran'ny avo mihoatra ny 505 nm, fidina midina miankavia miankavia amin'ny 505 nanometers, ary ny fisaintsainana ambony indrindra amin'ny ankavia amin'ny 505 nanometers nefa mbola mety misy fifindran'ny ambany 505 nm.
Inona no maha samy hafa ny sivana long pass sy band pass?
Ny sivana fluorescence dia azo zaraina ho karazany roa: LP (long pass) sy band pass (BP).
Ny sivana lavitr'ezaka dia mampita ny halavan'ny onjam-peo lava ary manakana ny fohy kokoa. Ny halavan'ny onjam-pandrefesana dia ny sandan'ny 50% amin'ny fifindran'ny tampon'isa, ary ny halavan'ny onjam-peo rehetra eo ambonin'ilay tapaka dia ampitaina amin'ny sivana lavitr'ezaka. Matetika izy ireo no ampiasaina amin'ny fitaratra dichroic sy sivana emission. Ny sivana Longpass dia tokony ampiasaina rehefa mitaky fanangonana entona avo indrindra ny fampiharana ary rehefa tsy tiana na ilaina ny fanavakavahana amin'ny spectral, izay amin'ny ankapobeny ny tranga ho an'ny probes izay miteraka karazam-biby iray mamoaka amin'ny santionany miaraka amin'ny haavon'ny autofluorescence ambany.
Ny sivana fandalovan'ny tarika dia mamindra tarika iray lava lava, ary manakana ny hafa. Mampihena ny crosstalk izy ireo amin'ny alàlan'ny famelana afa-tsy ny ampahany matanjaka indrindra amin'ny spectrum emission fluorophore, mampihena ny tabataba autofluorescence ary noho izany dia manatsara ny tahan'ny signal-to-noise amin'ny santionany autofluorescence avo lenta, izay tsy azon'ny sivana mandalo lavitra.
Firy ny karazana sivana fluorescence azo omena BestScope?
Ny karazana sivana mahazatra sasany dia misy sivana manga, maitso ary ultraviolet. Araka ny hita eo amin'ny latabatra.
| Set sivana | Sivana fientanam-po | Dichroic Mirror | Sivana sakana | Jiro LED Wave Length | Fampiharana |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | · FITC: fomba antibody fluorescent · Orange asidra: ADN, RNA · Auramine: bacillus tubercle ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | · Rhodamine, TRITC: fomba antibody fluorescent · Propidium iodide: ADN ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Fandinihana ny fluorescence mandeha ho azy · DAPI: fandokoana ADN · Hoechest 332528, 33342: ampiasaina amin'ny fandokoana Chromosome |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Katekolaminina 5-hydroxy tryptamine · Tetracycline: taolana, nify |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Ny setroka sivana ampiasaina amin'ny fahazoana fluorescence dia natao manodidina ny halavan'ny onjam-peo lehibe ampiasaina amin'ny fampiharana fluorescence, izay mifototra amin'ny fluorophores be mpampiasa indrindra. Noho izany antony izany dia nomena anarana avy amin'ny fluorophore natao ho an'ny sary izy ireo, toy ny DAPI (manga), FITC (maitso) na TRITC (mena) sivana cubes.
| Set sivana | Sivana fientanam-po | Dichroic Mirror | Sivana sakana | Jiro LED Wave Length |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas Red | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Ahoana ny fisafidianana sivana fluorescence?
1. Ny fitsipiky ny fisafidianana fluorescence sivana dia ny mamela ny fluorescence / emission jiro mandalo amin'ny faran'ny sary araka izay azo atao, ary manakana tanteraka ny excitation jiro amin'ny fotoana iray ihany, mba hahazoana ny ambony indrindra signal-to-noise ratio. Indrindra ho an'ny fampiharana ny fientanam-po multiphoton sy ny mikraoskaopy fisaintsainana anatiny manontolo, ny tabataba malemy dia hiteraka fanelingelenana lehibe amin'ny vokatry ny sary, noho izany dia avo kokoa ny fepetra takiana amin'ny tahan'ny tabataba.
2. Fantaro ny spektrum fientanam-po sy famoahana ny fluorophore. Mba hamoronana sivana fluorescence izay miteraka sary avo lenta sy mifanohitra amin'ny fiaviana mainty, ny fientanam-po ary ny sivana emission dia tokony hahatratra ny fifindran'ny avo miaraka amin'ny ripple passband kely indrindra amin'ny faritra izay mifanaraka amin'ny tampon'ny fientanam-po na ny famoahana fluorophore.
3. Diniho ny faharetan'ny sivana fluorescence. Ireo sivana ireo dia tsy maintsy tazonina amin'ny loharanom-pahazavana mahery vaika izay miteraka taratra ultraviolet (UV) izay mety hitarika ho amin'ny "firenena", indrindra amin'ny sivana exciter satria iharan'ny hamafin'ny loharanon'ny hazavana.
Ny sary santionany fluorescent samihafa
Ny loharanon-karena dia angonina sy voalamina amin'ny Internet, ary ampiasaina amin'ny fianarana sy ny fifandraisana fotsiny. Raha misy fanitsakitsahana dia mifandraisa aminay hamafa.
Fotoana fandefasana: Dec-09-2022